TÉCNICAS DE EDICIÓN GENÓMICA EN CARCINOMA HEPATOCELULAR

DINÁMICA DEL CRISPR / Cas9 MEDIADA POR LA EDICIÓN GENÓMICA DEL LOCUS  AXL EN CÉLULAS DEL CARCINOMA HEPATOCELULAR 

El presente estudio examinó la idoneidad de CRISPR / Cas9 para desactivar el receptor tirosina quinasa Axl en las líneas celulares de hepatoma humano, mediante edición genómica en dos clones de células individuales HLF y SNU449.
Un evento de edición genómica condujo a la inserción de dos aminoácidos que dieron como resultado una secuencia proteica alterada en lugar de un cambio de marco en el locus AXL de las células SNU449-Axl-1.
El estudio demuestra que la dinámica de CRISPR / Cas9 puede causar eventos de edición incompletos en las líneas celulares del cáncer, ya que los números de copias de los genes varían según la heterogeneidad genómica.


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TERAPIA CON STEM CELLS EN CARCINOMA HEPATOCELULAR


CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES INDUCIDAS, DERIVADAS PARA MODELOS 
DE CÁNCER E INVESTIGACIÓN DE CÉLULAS MADRE DEL CÁNCER

Usando estrategias de reprogramación de iPSC, las líneas celulares: HCC, HepG2 (WT-TP53), Hep3B (TP53 nula), Huh7 (mutación de TP53) y PLC (mutación de TP53) se reprogramaron en iPSCs. Entre estas células, Hep3B tuvo una mayor eficiencia de reprogramación debido al diferente nivel de expresión de p53.
Las infecciones por VHB y VHC a menudo conducen a cáncer de hígado. En la actualidad, muchos estudios utilizan iPSC normales que se diferencian en hepatocitos, son usados como una plataforma in vitro para estudiar la infección por VHB y VHC.


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TRANSGÉNICO EN CARCINOMA HEPATOCELULAR

MIR-199A-3P MODULA LAS RUTAS DE MTOR Y PAK4 E INHIBE EL CRECIMIENTO TUMORAL EN UN MODELO DE RATÓN TRANSGÉNICO CON CCH.
El presente estudio se encargo del estudio de la eficacia terapéutica de miR199a-3p, un miRNA altamente expresado en el hígado normal y regulado a la baja en prácticamente todos los HCC. El valor terapéutico de las moléculas de miR-199a-3p se analizó en el ratón TG221, un modelo transgénico altamente predispuesto al desarrollo del cáncer de hígado. 
La administración de miR-199a-3p en el ratón transgénico TG221 condujo una reducción significativa del número y tamaño de los nódulos tumorales. 



5 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS TRANSGÉNICOS 
VENTAJAS 
  1. Uno de los beneficios de los transgénicos, está en la producción farmacéutica, con el fin de crear nuevos medicamentos para diferentes enfermedades.
  2. Xenotrasplante, un proceso de trasplante de una célula o tejido de otra especie con fines médicos.
  3. La modificación de los genes de un animal progenitor puede producir descendientes con cualidades que los seres humanos pueden utilizar.
  4. Reducir los tiempos en la creación de nuevos cultivos con ventajas que se ven reflejadas en beneficios para la sustentabilidad del medio ambiente y de la sociedad.
  5. Son los únicos cultivos que para poder ser comercializados deben previamente pasar por una etapa de análisis de riesgo que garantice su seguridad para el medio ambiente y los consumidores. 
DESVENTAJAS 
  1. El uso de animales transgénicos no es ético.
  2. Pueden ser inseguros para el consumo humano, sostienen que no hay garantía sobre la seguridad de los productos provenientes de animales transgénicos, ya que no todos los experimentos e investigaciones son exitosos.
  3. Los opositores y defensores del bienestar animal están en contra de aplicaciones de animales transgénicos,tienen conocimiento que los animales pueden ayudar en la ciencia y la medicina. Sin embargo, también señalan que muchas vidas de animales están en peligro e incluso terminadas solo por una hazaña exitosa.
  4. Al igual que los experimentos de clonación, la transgénesis es un proceso costoso y necesita financiación.
  5. Cuando los cultivos se modifican para incluir antibióticos y otros elementos que matan gérmenes y plagas, se reduce la efectividad de un antibiótico u otro medicamento cuando se necesita en el sentido tradicional.

Resultado de imagen para transgenics




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ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA / ADN RECOMBINANTE EN CARCINOMA HEPATOCELULAR

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA
El término ADN recombinante debe distinguirse de los recombinantes de ADN naturales que resultan del cruce entre cromosomas homólogos. Los cromosomas homólogos intercambian ADN por entrecruzamiento durante la meiosis I, con lo cual, cada cromosoma de un gameto comúnmente contiene una mezcla de alelos de los dos cromosomas progenitores. 
Por tanto, cada óvulo y cada espermatozoide contienen ADN recombinante, que es de los dos progenitores del organismo.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21881/

Resultado de imagen para meiosis 1



ADN RECOMBINANTE EN CÁNCER HEPATOCELULAR 
El presente estudio se construyó un plásmido de ADN recombinante que expresaba los tres genes exógenos, VP3, IL-18 y hemaglutinina neuraminidasa (HN),se realizaron en líneas celulares H22 transfectadas con el plásmido de ADN recombinante. Los resultados del presente estudio revelaron que la vacuna de ADN recombinante que contiene los genes VP3, IL-18 y HN inhibió la proliferación celular e indujo la autofagia a través de la vía mitocondrial in vivo e in vitro.






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WESTERN BLOT: CARCINOMA HEPATOCELULAR

miR-505 enhances doxorubicin-induced cytotoxicity in hepatocellular carcinoma through repressing the Akt pathway by directly targeting HMGB1

El objetivo de este estudio fue explorar el efecto del eje miR-505 / HMGB1 sobre la citotoxicidad de ADM en células HCC. 
Los efectos de miR-505 y HMGB1 en la vía de la proteína quinasa B (Akt) se determinaron mediante el examen de los niveles de proteína de:
  • Akt fosforilada (p-Akt)
  • Akt
  • Glucógeno sintasa quinasa-3β fosforilada (p-GSK-3β) 
  • GSK-3β
Encontramos que la caída de HMGB1 y la sobreexpresión de miR-505: 
  • Exacerbaron la inhibición de la viabilidad celular inducida por ADM
  • Aumentaron la apoptosis inducida por ADM 
  • Aumentaron la actividad de caspasa-3 en las células HCC tratadas con ADM.

Bibliografía:
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PCR: EXPRESIÓN DEL ARNm DE METADHERINA EN EL CARCINOMA HEPATOCELULAR


  • Tema: Expresión del ARNm de metadherina en el carcinoma hepatocelular 
  • Objetivo: Evaluar el papel de la expresión de ARNm de MTDH en suero, en el diagnóstico de hepatocelularcarcinoma (CHC) y comparar sus niveles de expresión con los niveles séricos de alfa-fetoproteínaE 
  • Tipo de muestras biológicas: Sangre venosa 
  • Tipo de ácido nucleico a ser extraído: ARNm / ADNc 
  • Gen a amplificar: Gen metadherin 
  • Tipo de PCR: RT-PCR (PCR en tiempo real) 
          Pasos ADNc: 
          D: 42°C x 10 min
          H: 95°C x 5 min
          E: 4°C x 5 min 

         Pasos ARNm
         D: 95°C x 5 min
         H: 60°C x 30 seg
         E: 72° x 100 min 
  • Visualización: Fluorescencia 
  • Especificidad: 93%
https://ac-els-cdn-com.bibliotecavirtual.udla.edu.ec/S1110863018300223/1-s2.0-S1110863018300223-main.pdf?_tid=0140705c-8f86-483b-bb82-c16f8f5f74cf&acdnat=1543027941_57867a0f2d8c25e7101ad34033b291de



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PRUEBA DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA: CARCINOMA HEPATOCELULAR

PRUEBAS DE TAMIZAJE
El termino tamizaje en oncología se usa en relación con las pruebas para detectar el cáncer preclínico. La prueba debe encontrar CHC en una etapa en la que el tratamiento sea curativo,esto significa que la lesión debe ser única e idealmente más pequeña que 2 cm ya que la probabilidad de curación comienza a disminuir una vez que los tumores se vuelven más grandes que alrededor de 2.0 a 2.5 cm.
  • AFP: 
Prueba de detección deficiente,La sensibilidad es solo del 60%. Esto es inadecuadamente sensible para el uso general. A niveles más altos de AFP, la sensibilidad cae. 

  • DCP ( des-gamma carboxiprotrombina): 

Es más sensible que la AFP para el examen de CHC, pero aún no es lo suficientemente sensible.

  • Fracción L3 de AFP 

Es más específica para tumores que la AFP total

PRUEBA CONFIRMATORIA 
  • ECOGRAFÍA:
Prueba a elección, no es ideal pero es mejor que cualquiera de las otras pruebas. Un metanálisis muestra que la ecografía es más sensible que la AFP para detectar HCC pequeños.





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ALTERACIÓN DE LA EPIGENÓMICA EN CARCINOMA HEPATOCELULAR: AFLATOXINA

Las aflatoxinas son el resultado del metabolismo de ciertos hongos filamentosos que ejercen efectos tóxicos en la salud humana y animal. La IARC ha establecido una relación causal entre el cáncer y la exposición a las aflatoxinas, especialmente la Aflatoxina B1, quien es considerada como un evidente cancerígeno,el más potente hepatocarcinógeno.

https://www.apsnet.org/edcenter/K-12/NewsViews/Article%20Images/Forms/DispForm.aspx?ID=279

El rol de la AFB1 en el cáncer humano requiere una activación para producir mutaciones, de manera que para que la acción tóxica de la aflatoxina ocurra es necesario que ésta tenga un cambio metabólico, el cual ocurre cuando la AFB1 llega al hígado de los seres que la ingieren. Dicho cambio ocurre en las células hepáticas.


http://www.medigraphic.com/pdfs/revmedcoscen/rmc-2014/rmc144d.pdf



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ALTERACIONES DE LA TRADUCCIÓN: CARCINOMA HEPATOCELULAR

  • HCV GT1b
Los cambios de secuencia específicos en los codones 70 y 91 del gen central del virus HCV-GT1b se han asociado con un mayor riesgo de CCH. Las sustituciones de aminoácidos en la región central del virus de la hepatitis C son el predictor importante de la hepatocarcinogénesis.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4857454/


https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4857454/figure/jgv000219-f01/?report=objectonly


  • TP53
Las mutaciones en el gen TP53 están asociadas con aproximadamente el 50% de los cánceres humanos. Una mutación de punto de acceso, G: C a T:A transversión en el codón 249 (249T), puede ser un marcador potencial de ADN para la detección de CHC.



An external file that holds a picture, illustration, etc.
Object name is 12943_2015_340_Fig4_HTML.jpg
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4393630/figure/Fig4/





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ALTERACIONES DE LA TRANSCRIPCIÓN: CARCINOMA HEPATOCELULAR

-8 miRNAs  (miR-223, miR-98, miR-15b, miR-199a-5p, miR-19b, miR-22, miR-451 y miR-101) participaron en el HCC no relacionado con el VHB.
-5 miRNAs (miR -98, miR-375, miR-335, miR-199a-5p, y miR-22) participaron en la infección por VHB.
-7 miR-92b se alteraron específicamente en el CHC relacionado con el VHB.
Los miRNAs y el análisis de ontología génica y KEGG predicen que estos miRNAs de HCC promotores de la ARN polimerasa II y de la fosforilación de proteínas relacionados con el VHB están involucrados en la regulación de: transcripción, de señalización de MAPK, adhesión focal y citoesqueleto de actina.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5709924/figure/Fig1/?report=objectonly

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ALTERACIONES DE LA REPLICACIÓN: CARCINOMA HEPATOCELULAR


Se admite que la integración del genoma viral en el genoma de las células hepáticas infectadas y la proteína HBx viral son factores primordiales en la hepatocarcinogénesis. La proteína HBx del VHB , una pequeña proteína necesaria para la replicación viral, ha sido también implicada en la carcinogénesis hepática, aunque no se sabe bien los mecanismos por los que actúa. Inicialmente se comprobó que la HBx se une al p53 y bloquea los efectos apoptóticos de esta proteína. 

La aflatoxina B1 (AFB1 ) es una micotoxina identificada como el más potente hepatocarcinógeno. El metabolito que resulta del proceso de detoxificación de la AFB1 en el hígado tiene la capacidad de reaccionar con el ADN genómico, generando el aducto AFB1 -ADN; durante la replicación del ADN este aducto induce la transversión G:C→T:A.

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